Técnicas de Edición de Acidos Nucléicos en la Hemofilia A

Tipo de edición: Somática (células Neuro-2a y HEK-293), ex vivo

Dirigido hacia: gen F8 - locus mROSA26 de ratón (Knock-in dirigido del cDNA BDD-hF8).

Dirigido por: 

- pX458- mROSA26-int1-sgRNA1
- Cuatro plásmidos (variantes): p18T- BDD-F8-V3, p18T-BDD-F8-SQ, p18T-BDD-F8-Δ3, y p18T-BDD-F8-RH

Órgano a tratar: No se menciona en el artículo. Se estudia la viabilidad de los plásmidos introducidos en células Neuro-2a y HEK-293 (transfección). 

Vía de administración: Experimento In Vitro. Se menciona que las células obtenidas de los cultivos se utilizaron para otros experimentos y análisis (eficacia de sgRNA, integración genómica mediante NHEJ/HDR, actividad de coagulación del BDD-FVIII y otros).

Resultados: No se menciona resultados a corto o largo plazo. Se llegó a la conclusión de que la expresión transgénica de BDD-hF8 genera una proteína FVIII con funcionalidad de secreción, sentando bases para futuros estudios In vivo de la Hemofilia A (Observe Figura 1 y Figura 2). 

Figura 1. Actividad del FVIII de p18T-BDD-F8-V3 era aproximadamente 4,5 veces mayor que p18T-BDD-F8-SQ en células T HEK-293.

Figura 2. El grupo NHEJDonor+sgRNA-Cas9 y el grupo HDR-Donor+sgRNA-Cas9 mostraron niveles de actividad de la proteína FVIII en células Neuro-2a.

*NOTA: Se construyeron plásmidos donantes HDR y  NHEJ utilizando 5 sitios diferentes de endonucleasas en p18T-BDD-F8-V3.

Referencias Bibliográficas:

1. Zhao, L., Fang, S., Ma, Y., Ren, J., Hao, L., Wang, L., Yang, J., Lu, X., Yang, L., & Wang, G. (2024). Targeted genome engineering based on CRISPR/Cas9 system to enhance FVIII expression in vitro. Gene, 896, 148038. https://doi.org/10.1016/j.gene.2023.148038