TERAPIA EPIGENÓMICA EN LA ESQUIZOFRENIA

Tema: Inhibición de proteínas de la familia BET mejora los cambios en la expresión génica relacionados con la esquizofrenia

Mecanismo epigenómico tratado: Acetilación de histonas

¿Como se hizo?:

Se utilizaron fibroblastos de casos y controles de ascendencia caucásica/judía/escandinava, reprogramados mediante lentivirus inducibles por tetraciclina que expresan genes específicos. Las células se diferenciaron en neuronas y se trataron con JQ1 o un control de vehículo DMSO para estudiar la acetilación del ADN

Resultados:

- Se observó un enriquecimiento significativo de conjuntos de genes pre y postsinápticos.

- Células de la esquizofrenia mostraron correlaciones con conjuntos de genes presinápticos y relacionados con trastornos neuropsiquiátricos.

- Efectos sinérgicos entre SZ y el tratamiento con JQ1 confirmaron que los cambios en la expresión génica mejoraron con la inhibición de las proteínas BET.

Referencias Bibliográficas:

1. Farrelly, L.A., Zheng, S., Schrode, N. et al. Chromatin profiling in human neurons reveals aberrant roles for histone acetylation and BET family proteins in schizophrenia. Nat Commun 13, 2195 (2022). https://doi.org/10.1038/s41467-022-29922-0

Técnicas de Edición de Acidos Nucléicos en la Hemofilia A

Tipo de edición: Somática (células Neuro-2a y HEK-293), ex vivo

Dirigido hacia: gen F8 - locus mROSA26 de ratón (Knock-in dirigido del cDNA BDD-hF8).

Dirigido por: 

- pX458- mROSA26-int1-sgRNA1
- Cuatro plásmidos (variantes): p18T- BDD-F8-V3, p18T-BDD-F8-SQ, p18T-BDD-F8-Δ3, y p18T-BDD-F8-RH

Órgano a tratar: No se menciona en el artículo. Se estudia la viabilidad de los plásmidos introducidos en células Neuro-2a y HEK-293 (transfección). 

Vía de administración: Experimento In Vitro. Se menciona que las células obtenidas de los cultivos se utilizaron para otros experimentos y análisis (eficacia de sgRNA, integración genómica mediante NHEJ/HDR, actividad de coagulación del BDD-FVIII y otros).

Resultados: No se menciona resultados a corto o largo plazo. Se llegó a la conclusión de que la expresión transgénica de BDD-hF8 genera una proteína FVIII con funcionalidad de secreción, sentando bases para futuros estudios In vivo de la Hemofilia A (Observe Figura 1 y Figura 2). 

Figura 1. Actividad del FVIII de p18T-BDD-F8-V3 era aproximadamente 4,5 veces mayor que p18T-BDD-F8-SQ en células T HEK-293.

Figura 2. El grupo NHEJDonor+sgRNA-Cas9 y el grupo HDR-Donor+sgRNA-Cas9 mostraron niveles de actividad de la proteína FVIII en células Neuro-2a.

*NOTA: Se construyeron plásmidos donantes HDR y  NHEJ utilizando 5 sitios diferentes de endonucleasas en p18T-BDD-F8-V3.

Referencias Bibliográficas:

1. Zhao, L., Fang, S., Ma, Y., Ren, J., Hao, L., Wang, L., Yang, J., Lu, X., Yang, L., & Wang, G. (2024). Targeted genome engineering based on CRISPR/Cas9 system to enhance FVIII expression in vitro. Gene, 896, 148038. https://doi.org/10.1016/j.gene.2023.148038

TERAPIA CON STEM CELLS EN LA NEUROPATÍA ÓPTICA GLAUCOMATOSA

Tema: Cirugía y regeneración de células madre y no madre mesenquimales mediante la técnica de restauración de retina de Limoli para el tratamiento de la neuropatía óptica glaucomatosa.

Tipo de Stem Cell: Células madre del tejido adiposo (ADSC) contenidas en la fracción vascular estromal (SVF).

Método de obtención (de células madre): 

1. Las ADSC se recogieron de la grasa orbitaria durante el procedimiento quirúrgico (de un espacio situado encima del músc. oblicuo inf.).
2. Se coloca las ADSC sobre SVF. SVF se aislo de la grasa abdominal mediante la técnica Lawrence y Coleman.

Vía de administración: [Quirúrgico: Fibra de poliglactina 6/0] 

1. ADSC autólogas se insertan mediante un pequeño tubo plástico en el espacio entre el colgajo, la coroides y el autoinjerto supracoroideo.
2. Antes de cerrar, se llena el espacio restante con 0,5cc de ADSC en SVF utilizando una cánula de 25 G.
3. Cierre de la sutura.

*Después de la cirugía se administra antibiótico (500mg de azitromicina) durante 3 días. Además se proporciona tto con gotas combinada para los ojos (cloranfenicol y betametasona), durante 15-20 días.

Resultados: No se hacen referencias concretas de los efectos a corto, medio y largo plazo. Después de 6 meses se hace una comparación de los pacientes que fueron operados y los del grupo control. Se evaluaron varios parámetros como: evolución de "mejor agudeza visual corregida", aumento de la visión de cerca y evolución de la sensibilidad. 

Se observo una mejora notable en los pacientes que se realizaron la cirugía que los del grupo control (Observe la Figura 2).

Figura 1. Representación de la técnica de restauración de retina de Limoli. Obtenido de: (1)

Figura 2: Microperimetría de un paciente antes y después del tratamiento quirúrgico. Después de 6 meses, la sensibilidad ha mejorado. Obtenido de: (1)

Referencias Bibliográficas:

1. Limoli, P. G., Limoli, C., Vingolo, E. M., Franzone, F., & Nebbioso, M. (2021). Mesenchymal stem and non-stem cell surgery, rescue, and regeneration in glaucomatous optic neuropathy. Stem cell research & therapy, 12(1), 275. https://doi.org/10.1186/s13287-021-02351-4

ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL EN LA LESIÓN PULMONAR AGUDA Y RECOMBINACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS EN LA NATURALEZA

Ejemplo de recombinación de ácidos nucleicos en la naturaleza

Los bacteriófagos introducen su material genético en el citoplasma de la bacteria e inician su replicación. (1)

Imagen obtenida de: https://nikolaussucher.github.io/biology-text/figures/bacteria/Phage_injecting_its_genome_into_bacteria.svg

Ejemplo de ADN recombinante artificial en lesión pulmonar aguda

T: CC16 encapsulado en nanovesículas para el tratamiento de la lesión pulmonar aguda (ALI)

O: Demostrar que CC16 encapsulado en vehículos eléctricos (sEV-CC16) puede ser un agente terapéutico para la ALI debido a su actividad antiinflamatoria.

G: CC16 [no se menciona pb] y ADNc de HSP60 [no se menciona pb].

ER: Kpn I y Xho I

EL: [no menciona el artículo].

V: pRP-Puro-CMV, pcDNA3.1 y pEGFP-C1-PKM2

CR: Transfección de BEAS-2B (cél del epitelio bronquial)

MTG: Físico: vector pRP-Puro-CMV se transfectó en BEAS-2B mediante electroporación (1290 V, 20 ms, dos pulsos) utilizando transfección de neón.

MIC: Cultivo celular (BEAS-2B, THP-1 y HEK293T); Análisis de Western Blot, ensayo coIP y ELISA; Transcripción inversa, qRT-PCR.

Referencias bibliográficas:

1. de Jesús Balderas-Cisneros, F. (2018). Modificación genética del bacteriófago oX174 para generar una replicación controlada en Escherichia coli para su uso como agente antimicrobiano. Revista de Ciencias Farmaceúticas y Biomedicina (ISSN: 2448-8380), 25-25. Recuperado de: https://rcfb.uanl.mx/index.php/rcfb/article/view/95/91

2. Han, Y., Zhu, Y., Almuntashiri, S., Wang, X., Somanath, P. R., Owen, C. A., & Zhang, D. (2023). Extracellular vesicle-encapsulated CC16 as novel nanotherapeutics for treatment of acute lung injury. Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy, 31(5), 1346–1364. https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2023.01.009