Importancia de la claudina-10a en patologías renales a través del análisis con la técnica western blot

La claudina-10a es un canal aniónico paracelular del túbulo proximal. Mutaciones en el gen CLDN10 afectan a isoformas de la claudina-10. Se utilizaron ratones con deficiencia de claudina-10a (reemplazada por claudina-2) y se confirmó el desequilibrio mediante Western blot. Se reveló alteraciones en el transporte tubular distal y tras deleción de la claudina-10a se observó hiperreabsorción de Ca+ y Mg+ por redistribución de la claudina-2.

Imagen 1. Las señales de claudina-10 se redujeron en ratones Cldn10a KO (-/-) en comparación con ratones WT (+/+). La señal residual de claudina-10 en (-/-) se debe a claudina-10b.
Observe los niveles de claudina-2 en ratones (-/-).

Referencias bibliográficas:

1. Breiderhoff, T., Himmerkus, N., Meoli, L., Fromm, A., Sewerin, S., Kriuchkova, N., Nagel, O., Ladilov, Y., Krug, S. M., Quintanova, C., Stumpp, M., Garbe-Schönberg, D., Westernströer, U., Merkel, C., Brinkhus, M. A., Altmüller, J., Schweiger, M. R., Müller, D., Mutig, K., Morawski, M., … Günzel, D. (2022). Claudin-10a Deficiency Shifts Proximal Tubular Cl- Permeability to Cation Selectivity via Claudin-2 Redistribution. Journal of the American Society of Nephrology : JASN, 33(4), 699–717. https://doi.org/10.1681/ASN.2021030286

TÉCNICAS DE PCR EN EL DIAGNÓSTICO DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B

TEMA: Diagnóstico del virus de la hepatitis B.

OBJETIVO: Determinar el diagnóstico de la infección por el virus de la hepatitis B, mediante el proceso de PCR convencional.

MUESTRA: Suero (sangre periférica)

TIPO DE ÁCIDO NUCLEICO: ADN circular relajado (ADNrc)

EXTRACCIÓN (LISIS, SEPARACIÓN, PURIFICACIÓN): Se extrajo 200 μL de suero (utilizando kit QIAamp MinElute Virus Spin), posterior se evaluó la calidad de ADN extraído (espectrofotometría Nanovue) mediante amplificación de un fragmento del gen que codifica para la β-actina (control interno). Se almacena a -89 °C hasta su uso.

GENES A ANALIZAR: Gen S (116 pb), cccDNA

TIPO DE PCR: PCR convencional

PASOS:

• DESNATURALIZACIÓN Y ACTIVACIÓN DE LA POLIMERASA: 95 °C por 10 min.

• DESNATURALIZACIÓN: 95 °C por 1 min x 35 ciclos

• HIBRIDACIÓN: 60 °C por 1 min

• ELONGACIÓN: 72 °C por 2 min

• FINAL DE EXTENSIÓN: 72 °C por 10 min

VISUALIZACIÓN: Electroforesis en gel (poliacrilamida al 6%)

Referencias bibliográficas:

1. Zhang, H., & Tu, T. (2022). Approaches to quantifying hepatitis B virus covalently closed circular DNA. Clinical and molecular hepatology, 28(2), 135–149. https://doi.org/10.3350/cmh.2021.0283

2. Zauli, D. A., Menezes, C. L., Oliveira, C. L., Mateo, E. C., & Ferreira, A. C. (2016). In-house quantitative real-time PCR for the diagnosis of hepatitis B virus and hepatitis C virus infections. Brazilian journal of microbiology : [publication of the Brazilian Society for Microbiology], 47(4), 987–992. https://doi.org/10.1016/j.bjm.2016.07.008

ALTERACIÓN DE LA EPIGENÉTICA EN LA ENFERMEDAD DE PARKINSON

La disfunción mitocondrial induce a una alteración epigenética por hiperacetilación de H3K27 perturbando los potenciadores activos en la Enfermedad de Parkinson. La desregulación de H3K27ac perturba el perfil transcriptómico y afecta la expresión génica corriente abajo. (1)

Figura 1. Modelo propuesto para la desregulación de H3K27ac en la neurodegeneración dopaminérgica. Observe además que la alteración del proteasoma y el desequilibrio HDAC/HAT inducen a la hiperacetilación de histonas en los sitios K27 y K36. Recuperado de: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8492320/

Referencias bibliográficas:

1. Huang, M., Lou, D., Charli, A., Kong, D., Jin, H., Zenitsky, G., Anantharam, V., Kanthasamy, A., Wang, Z., & Kanthasamy, A. G. (2021). Mitochondrial dysfunction-induced H3K27 hyperacetylation perturbs enhancers in Parkinson's disease. JCI insight, 6(17), e138088. https://doi.org/10.1172/jci.insight.138088

ALTERACIONES DE LA TRADUCCIÓN EN LA INSUFICIENCIA HEPÁTICA AGUDA

La proteína PERK se activa por la presencia de proteínas mal plegadas del retículo endoplasmático (RE) y fosforila eIF2α. Esto provoca una reducción en la síntesis de proteínas permitiendo que la célula tenga tiempo para volver a plegarse o degradar cualquier proteína mal plegada. (1)

Figura 1. La respuesta proteica desplegada. Nótese que en la vía PERK, la eIF2α desencadena la activación de ATF4 regulando el alza de genes clave (GADD34 y CHOP) para restaurar la síntesis de proteínas después del estrés del RE.
Obtenido de: https://febs.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/febs.14422

Referencias bibliográficas:

1. Hughes, D., & Mallucci, G. R. (2019). The unfolded protein response in neurodegenerative disorders – therapeutic modulation of the PERK pathway. The FEBS Journal, 286(2), 342–355. https://doi.org/10.1111/febs.14422

2. Zhang, Q., Piao, C., Xu, J., Wang, Y., Liu, T., Ma, H., & Wang, H. (2023). ADSCs-exo attenuates hepatic ischemia-reperfusion injury after hepatectomy by inhibiting endoplasmic reticulum stress and inflammation. Journal of cellular physiology, 238(3), 659–669. https://doi.org/10.1002/jcp.30968